熒光定量PCR儀所用到的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是通過對PCR擴(kuò)增反應(yīng)中每一個(gè)循環(huán)產(chǎn)物熒光信號(hào)的實(shí)時(shí)檢測，而實(shí)現(xiàn)對起始模板定量及定性分析的目的。在實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)中，引入了一種熒光化學(xué)物質(zhì)，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計(jì)，熒光信號(hào)強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個(gè)循環(huán)，收集一個(gè)熒光強(qiáng)度信號(hào)，這樣就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測產(chǎn)物量的變化，從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖，達(dá)到監(jiān)測PCR產(chǎn)物擴(kuò)增量的目的。

　　一般而言，熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個(gè)階段：熒光背景信號(hào)階段、熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺(tái)期。在熒光背景信號(hào)階段，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化；而在平臺(tái)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間沒有線性關(guān)系，因此根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出起始DNA拷貝數(shù)。只有在熒光信號(hào)指數(shù)擴(kuò)增階段，PCR產(chǎn)物量的對數(shù)值與起始模板量之間存在線性關(guān)系，故選擇該階段進(jìn)行定量分析。為了較方便的進(jìn)行DNA拷貝數(shù)的定量，在實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)中引入了三個(gè)非常重要的概念：基線、熒光閾值和Ct值。

　　熒光定量PCR儀的實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是DNA定量技術(shù)的一次飛躍。運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)我們可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量和定性分析。定量分析包括絕對定量分析和相對定量分析。前者可以得到某個(gè)樣本中基因的拷貝數(shù)和濃度；后者可以對不同方式處理的兩個(gè)樣本中的基因表達(dá)水平進(jìn)行比較。